EB病*相关肝内胆管癌
碎片学习
肝内胆管癌（intrahepaticcholangiocarcinomaICC）是指起源于二级胆管及其分支上皮的腺癌。ICC约占肝脏原发恶性肿瘤的10%-15%。ICC是发病率仅次于肝细胞肝癌的肝脏原发恶性肿瘤，近年来发病率呈上升趋势。ICC早期无明显临床症状，多数患者发现时已失去手术时机，因此对ICC的早期诊断和及时治疗提出了更高的要求。下面我们来学习EB病*相关肝内胆管癌研究的相关知识吧！
EB病*(Epstein-Barrvirus,EBV)的发现是医学史上一项革命性的发现，这个由MichaelAnthonyEpstein和YvonneBarr观察到并命名的病*，目前证明与鼻咽癌、淋巴瘤有着千丝万缕的联系，随着研究的进一步深入，科研人员在一些常见的肿瘤如胃癌、肺癌、胆道肿瘤等恶性疾病中也观察到了它的身影。年6月，中山大学*雨华团队确诊了中山大学肿瘤防治中心首例EB病*相关性肝内胆管细胞癌，并观察到该病具有较为独特的临床病理特征，从而开展了相关回顾性研究工作——《EB病*相关性肝内胆管细胞癌的临床病理、肿瘤免疫微环境和基因组学特征》。研究成果于年11月17日在国际顶尖消化专业期刊《肝病学杂志》（JournalofHepatology,IF:25.）在线发表。
01
背景和目的
肝内胆管细胞癌是肝脏第二常见的恶性肿瘤，在亚洲人群高发。近数十年，肝内胆管细胞癌的发病率呈上升趋势。该肿瘤侵袭性强、手术可切除率低、目前治疗手段仍非常有限、患者预后差。然而，迄今为止，50%肝内胆管细胞癌病例的病因仍不清楚。由于EBV相关肝内胆管癌非常罕见，目前对其知之甚少。该研究目的在全面研究该实体在中国南方（EB病*感染高发区）的临床病理、肿瘤免疫微环境和基因组。
02
方法
使用原位杂交的方法评了估例肝内胆管癌的患者,比较EB病*相关性肝内胆管细胞癌（EBVaICC）和非EB病*相关性肝内胆管细胞癌（nonEBVaICC）之间临床病理参数的区别，通过免疫组织化学双染色,嵌套PCR,多重免疫荧光染色,荧光原位杂交和全外显子组测序的方法分析EBVaICC的EB病*感染状态,肿瘤浸润淋巴细胞和基因组特征。
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研究结果
在中国华南地区与EB病*相关的原发性肝内胆管细胞癌占6.6%（20/），且在肿瘤细胞中发现了EBER1，证明均为EB病*潜伏I型感染，通过双染色（EBER-棕色、CK7-红色）发现EB病*仅存在于恶变的胆管细胞中，在其临近的正常胆管中并未发现EB病*。（图1）
在20例患者中分为两种淋巴上皮瘤样型（LEL型，9例）和传统型（CT型，11例）。相较于普通ICC，该病患病人群主要为年轻女性，同时伴乙肝感染的几率更高，存在肝硬化背景的患者更少，未发现存在胆石症的患者，血清CA水平更低，LEL型的比例明显增加。同时，LEL型的OS显著优于CT型及nonEBVaICC，但是RFS无明显优势。（图2）
图1
图2
（图片出处：HuangYH,ZhangCZ,HuangQS,YeongJ,WangF,YangX,HeYF,ZhangXL,ZhangH,ChenSL,ZhengYL,DengR,LinCS,YangMM,LiY,JiangC,Kin-WahLeeT,MaS,ZengMS,YunJP.Clinicopathologicfeatures,tumorimmunemicroenvironmentandgenomiclandscapeofEpstein-Barrvirus-associatedintrahepaticcholangiocarcinoma.JHepatol.Apr;74(4):-.doi:10./j.jhep..10..EpubNov17.PMID:.）
从浸润的淋巴细胞来看，CD20+B淋巴细胞、CD3+T淋巴细胞和CD68+TAMs、CD8+、PoxP3+、CTLA4+T细胞和HLA-DR+M1TAMs、CD+M2TAMs的密度在EBVaICC中均显著升高。（图3）
LEL亚型中浸润的CD20+B细胞和CD8+T细胞比例和密度均显著增加，CD20+B细胞和CD8+T细胞密度与ICC的OS和RFS显著相关。（图4）
图3
图4
（图片出处：HuangYH,ZhangCZ,HuangQS,YeongJ,WangF,YangX,HeYF,ZhangXL,ZhangH,ChenSL,ZhengYL,DengR,LinCS,YangMM,LiY,JiangC,Kin-WahLeeT,MaS,ZengMS,YunJP.Clinicopathologicfeatures,tumorimmunemicroenvironmentandgenomiclandscapeofEpstein-Barrvirus-associatedintrahepaticcholangiocarcinoma.JHepatol.Apr;74(4):-.doi:10./j.jhep..10..EpubNov17.PMID:.）
通过免疫组化的方法，发现在一名PD-L1基因扩增阴性的EBVaICC病例标本中，肿瘤细胞的PD-L1及肿瘤浸润淋巴细胞的PD-L1、PD1表达均成阳性，然而在nonEBVaICC的标本中PD-L1或PD1仅有一种表达阳性。（图5）
ICC主要存在四种免疫微环境（TMITⅠ、Ⅱ、Ⅲ，Ⅳ），与nonEBVaICC相比较，在EBVaICC中TMITⅠ型明显更高。四种类型的OS及RFS也存在不同。（图6）
图5
图6
（图片出处：HuangYH,ZhangCZ,HuangQS,YeongJ,WangF,YangX,HeYF,ZhangXL,ZhangH,ChenSL,ZhengYL,DengR,LinCS,YangMM,LiY,JiangC,Kin-WahLeeT,MaS,ZengMS,YunJP.Clinicopathologicfeatures,tumorimmunemicroenvironmentandgenomiclandscapeofEpstein-Barrvirus-associatedintrahepaticcholangiocarcinoma.JHepatol.Apr;74(4):-.doi:10./j.jhep..10..EpubNov17.PMID:.）
04
讨论及总结
EBVaICC在中国南方的发病率(6.6%)与EB病*相关性胃癌发病率(5.1%)大致相当，常见于年轻女性，相较于其它类型的肝内胆管细胞癌有着更高的HBV感染背景（是否HBV在该病的发展中发挥着协同作用尚未发现证据，有兴趣的小伙伴可以开展研究），更低的肝硬化背景，淋巴上皮瘤样型（LEL）占多数。此外，该研究还进一步揭示了该肿瘤的免疫微环境特点，表现为肿瘤间质浸润的免疫细胞显著增多，肿瘤细胞PD-L1表达显著上调，90%病例属于肿瘤免疫微环境I型（PD-L1Tumor+、CD8-High），文章还展示了一例采用免疫治疗3.5年、生存时间超过7年的晚期EB病*相关性肝内胆管细胞癌病例，因此提出EB病*相关性肝内胆管细胞癌是较适合行免疫检查点抑制剂治疗的肝内胆管细胞癌亚型，患者有望从中获益。同时也有一些有趣的发现：例如该病*目前只发现存在于肝内胆管细胞癌中，在肝门胆管癌、远端胆管癌、混合型肝细胞癌中暂未发现，以及在恶变胆管周围的正常胆管中也未分离出EB病*（是否意味着EB病*的感染发生在肿瘤细胞扩增之前，或者肿瘤组织来源于单一的被感染的祖细胞）。不过虽然该研究在EB病*感染率高的中国南方开展，可供研究的EBVaICC依旧很少，且由于标本质量的问题，全基因组测序未能进行。
该研究目前有望被肝内胆管细胞癌病理学分型国际指南采纳，有兴趣的同学可以点击
